蝴蝶兰的组织培养和快速繁殖技术

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蝴蝶兰是一种热带气生兰，花似蝴蝶，故名。其花形美丽，色彩丰富，花期长，被誉为热带兰花中的“兰花皇后”。是近年来最受欢迎的兰花之一。蝴蝶兰是单茎气生兰，植株很少长出侧芽，种子极难萌发。所以蝴蝶兰常规繁殖导致增殖缓慢。因此，常采用组织培养进行快速繁殖，以达到工厂化育苗的目的。1.蝴蝶兰快速繁殖的外植体包括茎尖、茎段、叶片、花梗腋芽、花梗节间、根尖等。方法不一样，难度不一样。2.不同的外植体用于取样、消毒和初代培养，取样、消毒和初代培养的方法也不同。分别介绍以下方法：花梗腋芽培养。将蝴蝶兰的花梗剪开，用75%酒精棉球擦拭，切成带芽5cm左右的小段，小心翼翼地去掉苞叶，防止伤到嫩芽，然后用2%次氯酸钠溶液消毒20分钟，不断摇晃。消毒后用无菌水冲洗3~5次，放入培养皿中。用4号手术刀在两端切去0.5cm，将芽向上插在1/2ms3mg/L6苄基腺嘌呤培养基上。培养基中应添加20g/L蔗糖、1g/L水解乳蛋白、8g/L琼脂和1g/L活性炭，并调节pH值至5.6。培养茎尖是组织培养成功率较高的部分，但蝴蝶兰的茎尖深藏在叶片的缝隙中，很难分离和消毒。茎尖的获得有两种方法：一种是用水清洗去叶的茎，然后用10%漂白粉溶液进行表面灭菌15分钟，去除袁烨碱，然后用5%漂白粉溶液灭菌10分钟，再用无菌水清洗。将茎尖和每片叶基部的腋芽，大小约2~3mm，接种在培养基上，液体培养用含15%椰奶的VW培养基，或加9g/L琼脂固体培养。培养温度为25，光照强度为2000勒克斯，每天光照时间为16~24小时。以160rpm的速度摇动液体，然后在7-10天后转移到新的培养基中。从开始培养，1个月后转入固体培养基。在此条件下，培养一个月后可形成类原球茎，然后进行继代培养。二是诱导花梗侧芽成为植株，然后用试管苗的茎尖进行培养。方法是：在双目显微镜下剥下大小约0.3mm的茎尖，接种于MS3mg/L6苄基腺嘌呤固体培养基上，在温度、光强1,500le、每天光照10小时的条件下培养。14天后，茎尖膨大，呈浅绿色半球形。3个月后，长成一个组织块为6mm的桑葚状原球茎。这种方法最大的优点是省去了外植体消毒的程序，成功的可能性高。花梗节间的培养正在伸展的蝴蝶兰幼花茎具有分化原球茎的能力，因此可以用快速伸展的花梗节间作为培养材料。从花梗可见的时间到接下来的45天，所有幼花序和花梗等具有细胞分裂能力的节间组织最有利于诱导原球茎形成，成功率为62.9%~77.1%。从第一芽开始，随着花梗的发育和分化，原球茎的比例下降，可作为外植体的节间变短。具体操作方法如下：将花梗节间切开，表面消毒，斜切成1-1.5mm厚的薄片，平铺在固体斜面培养基上。培养基配方为：1.2倍VW无机盐，100mg/L肌醇，0.5mg/L维生素B1，B6和烟酸，1mg/L6苄基腺嘌呤，2%蔗糖，0.8%琼脂。培养温度为,光照强度为500L，每天光照16小时。叶片培养：从3-4个月龄的蝴蝶兰植株上取嫩叶，用自来水冲洗干净。在超净的工作台上，树叶正在消毒

将幼叶切成片，在诱导培养基上培养1~2个月后，每片叶组织可产生1~7个原球茎。根组织培养：取正在培养的花梗苗，切下根尖约1~1.5厘米长，用手术刀切下约1毫米的尖端，露出根分生组织，接种根尖诱导培养基MS8~12mg/L6-苄基腺嘌呤0.5~1.0mg/LNAA10%椰奶，加入3%蔗糖，培养基中加入泡沫海绵，pH5.4~液体振荡培养，培养温度,光照强度1000~20020天左右，材料膨胀，表面颜色明显变深。60天后，根分生组织开始有分化芽，分化率约为60%。约45天后，切下分化出的芽，转移到原球茎诱导培养基2/3ms1~3mg/L6苄基腺嘌呤0.5~1.0mg/LNAA10%椰子汁中，加入3%蔗糖和0.7%琼脂。2个月后可形成原球茎。3.继代培养后，蝴蝶兰早期的原球茎状球体看起来像肿瘤样的愈伤组织。连续培养后，表面凸起，部分表面细胞分化为根毛。原球茎球状体形成后，取出原球茎，在无菌条件下切成若干小块。切下的小块不宜过小，然后转入继代培养基MS2.0mg/L6苄基腺嘌呤0.5mg/L萘乙酸中进行增殖培养。或者在原球体的诱导中，以1/2MS为基本培养基，2mg/L的6苄基腺嘌呤和0.2mg/L的萘乙酸为激素，20g/L的糖，8g/L的琼脂，调节pH值至5.6也能得到理想的效果。培养60天左右，然后分裂转移。这样，原球茎就可以大量繁殖。4.小植株将在不继代培养原球茎的情况下培养。在无菌条件下，将丛生的小苗切下，将小苗转移到育苗培养基上培养。1/2ms1.5mg/L吲哚丁酸0.05mg/L萘乙酸可作为培养基，并添加20g/L蔗糖、12g/L琼脂、5g/L活性炭和200ml/L椰子汁。或2/3MS香蕉100g/L，蔗糖30g/L，琼脂7g/L。此后，将其转移到含有0.8mg/L萘乙酸的1/2ms生根培养基中。不久，小苗就生根了。当幼苗长到一定大小时，将它们移入温室。切下丛生小苗时，应将基部未分化的原球茎和新分化的芽作为幼苗连接到诱导培养基上。一段时间后，将长出的幼苗移出种植，幼苗和原球茎可以继续增殖分化。5.试管苗出瓶移栽。当小苗长到4cm左右，有3~4片叶，2~3根时，即可移栽。这时，试管苗用瓶子移入温室。1-2周后，瓶塞半开或全开3-5天，取出组培苗。用自来水冲洗根部的培养基，用50%多菌灵水溶液消毒根部2小时，药液浓度为1000倍。干燥后，可将幼苗种植在水苔穴盘中。新栽植物的温度白天为20~25，夜间为18~23。从现在起，温室内的日温应为25~29，夜温应为20~24。湿度要在80%~90%，以后要保持在70%左右。初始光线不要太强，一般1500~2500le为好。使用遮阳网较多，春秋季一层遮阳网覆盖50%左右，夏季双层遮阳网覆盖70%左右。冬季可适当减少遮光。缓苗后，光照强度逐渐增加到6000~8000le。蝴蝶兰的根部避免积水，水分过多容易导致根腐。刚出瓶的小苗由秦英补水，中苗或大苗根据干湿程度浇水；一般情况下，当盆中基质表面已经变干，盆表面水草略白时，再浇水。春季可每4~5天浇水一次，保持盆内基质湿润。浇水时，要将整个基质浸湿。浇水时间以早晨或清晨为好。移栽初期不准施肥，李

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